分子定向進化是利用現代分子生物學方法,人為模擬自然進化機制,人工合成大量的突變同源基因文庫。然后,采用靈敏的定向篩選策略,創造出自然界不存在的或某些特性有顯著改變的突變蛋白質或其他生物分子。分子定向進化已廣泛應用于蛋白質的分子改造,抗體親和力成熟等方向,被認為是改良全新蛋白質特性或優化序列的高效方法。

精準突變文庫可以改變蛋白質的特定位點或者DNA的調控區域,可以用來研究結構和功能之間的關系。根據不同設計目的,體外合成的精準突變文庫可以更精確、更隨意的控制所研究序列的多樣性。而且,合成的精準突變文庫可以顯著提高獲得核酸或蛋白質突變體的效率,有助于下游研究。泓迅科技可以設計或合成客戶所需的各種DNA精準突變文庫。

服務優勢

序列控制精準 合成效率高 高性價比方案 高度定制化

文庫類型

1、簡并突變文庫

遺傳密碼子具有簡并性,即一個氨基酸可由一個以上的三聯體密碼子編碼的現象。利用遺傳密碼的簡并性可以在保持氨基酸序列多樣性的同時,減少密碼子的冗余,提高篩選效率。

服務優勢

?    高效率產品交付
?    合成技術穩定,質控嚴格
?    20種氨基酸100%覆蓋,充分保證文庫多樣性

案例一

NNK文庫是一種經典的簡并突變文庫,所使用的 NNK簡并引物包含了32(4x4x2)種密碼子組合(N= A/C/G/T, K= G/T),覆蓋了所有20種氨基酸,可以將任意位點的氨基酸進行飽和突變。


圖1. NNK文庫,其中5個NNK位點所包含的每種密碼子的比例

2、Trimer文庫

使用單一核苷合成的引物,在突變位點處會不可避免的產生冗余突變和終止密碼子。將三個核苷按固定順序連接起來所形成的三聯核苷(Trimer Phosphoramidites)可以對應單一的氨基酸,不僅可以在被突變序列的任意位置引入全部20個氨基酸的混合物,而且可以避免密碼子偏移、移碼突變和控制終止密碼子的摻入等問題。

以Trimer混合物作為元件設計的精準文庫,即Trimer文庫,能夠保證突變位點的氨基酸按照設計的比例構成,滿足特定位點氨基酸的多樣性和密碼子的偏好性。因此,Trimer文庫常被用于解決復雜型文庫的設計和合成問題,可進一步提高文庫篩選的精確度和準確性。

服務優勢

?    高性價比解決方案
?    降低后續篩選難度
?    合成效率高,序列控制精準

案例一

Trimer文庫可用于進行位點飽和突變,將20種氨基酸等比例分布,進一步減少文庫中密碼子冗余,去除終止密碼子。

Trimer文庫
圖2. Trimer文庫,也是每種氨基酸等比例分布的飽和突變文庫,
其中5個位點所包含的每種密碼子的比例

案例二

Trimer文庫還可自定義每個位點由比例不等的氨基酸組成,在中4個Trimer位點中,如X1 Trimer位點為A (80%) :G(3%) :R (3%) :S (3%):T (8%) :V (3%)

自定義氨基酸的種類和比例 每種氨基酸的實際比例與理論比例之間的比值
圖3.自定義氨基酸的種類和比例 圖4. 每種氨基酸的實際比例與理論比例之間的比值

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