CRISPR sgRNA文庫合成

研究基因在代謝通路或某些特定疾病發生過程中的功能,對于疾病機理研究及藥物研發具有非常重要的意義。新一代基因編輯技術CRISPR以其操作簡單和通用的獨特優勢,成為開展正向遺傳學篩選實驗強有力的工具。利用CRISPR技術建立可能與某類功能相關的突變體庫,通過功能性篩選和富集、PCR擴增及深度測序分析,確認與這類功能相關的基因。

泓迅科技利用獨創的“GPS”(Genotype,Phenotype,Synotype)平臺,提供基于CRISPR sgRNA文庫的一站式基因功能篩選服務。我們專利的Syno?合成技術平臺,可以快速高效地實現sgRNA文庫構建,并包裝成慢病毒混合文庫后轉染細胞。結合高通量/高內涵篩選平臺,利用控制細胞存活、結合免疫染色、流式細胞術等手段篩選得到所需細胞,最終通過測序等方法推斷出發揮作用的靶基因。

CRISPR sgRNA文庫合成技術路線圖

CRISPR-Cas9 sgRNA文庫合成

CRISPR基因編輯平臺一體化服務流程

CRISPR基因編輯平臺一體化服務流程

泓迅CRISPR sgRNA文庫構建服務優勢

  1. 豐富的全基因組sgRNA設計經驗,覆蓋幾十種模式物種,亦可針對客戶需求的模式物種進行sgRNA設計。
  2. 根據客戶自身需求選擇sgRNA表達載體,并提供轉染級質粒。
  3. 行業內領先的QC指標。
  4. 提供從sgRNA設計、文庫構建到慢病毒包裝的一站式服務。

CRISPR sgRNA文庫合成和構建服務

泓迅科技CRISPR一站式基因編輯服務包括sgRNA序列設計、文庫構建、NGS驗證、慢病毒包裝等,為客戶提供基因功能篩選全套解決方案。

 

服務項目 服務詳情 周期
sgRNA設計 針對特定基因分類進行gRNA序列設計
每個基因設計3-6條sgRNA
1-2周
芯片合成 將所設計的所有sgRNA及陰性對照合成在一張芯片上 3-4周
sgRNA文庫構建 將sgRNA構建到客戶的目標載體上 2-3周
文庫質粒大抽 根據發貨量進行轉染級質粒抽提 1周
文庫質檢及NGS驗證(可選)
  1. 克隆覆蓋倍數必須大于100倍
  2. 克隆正確率大于70%
  3. NGS驗證的文庫正確率大于80%
  4. NGS驗證文庫的均一性指標小于10
2-3周
病毒包裝(可選) 慢病毒包裝,病毒滴度: 108TU/ml 2-3周
總計 11-16周

 

CRISPR sgRNA文庫構建與篩選應用實例

【經典案例】已知藥物功能篩選其耐藥靶點的方案:

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

  1. 明確該藥物功能及其致死工作濃度。
  2. 構建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文庫并侵染細胞,構建整合CRISPR-Cas9 gRNA的細胞混合克隆。
  3. 篩選:高濃度藥物短期內持續作用細胞混合克隆,成活的細胞即為產生耐藥性的細胞,其耐藥性的產生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA導致的基因改變。
  4. 存活的細胞通過二代測序,比對得到gRNA 信息,從而推斷出起作用的基因靶點。
CRISPR-Cas9 sgRNA文庫合成 CRISPR-Cas9 sgRNA文庫合成

CRISPR sgRNA文庫合成訂購與咨詢

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  2. 電話咨詢:您可以直接撥打免費熱線4000-973-630(按1)聯系我們經驗豐富的工程師
  3. 在線咨詢:您有任何技術問題均可與我們進行網頁在線互動