CRISPR/Cas9基因編輯技術已廣泛應用于多物種、多領域的研究,使細胞和生物體的基因組編輯更加高效。將sgRNA送入細胞的傳統方法是通過質粒轉染和慢病毒感染,兩者都存在基因插入和免疫反應的風險。目前,將Cas9和sgRNA形成的核糖核蛋白(RNP)直接轉移到細胞中的方法具有更安全、更快速、脫靶效應更低、編輯效率更高的優點。這已逐漸成為使用 CRISPR/Cas9 技術的一種更有效的方式。

泓迅科技專業的合成技術可提供基于化學合成及體外轉錄兩種策略的即用型sgRNA合成服務,為基因編輯實驗者提供多樣的解決方案。

· CRISPR-Cas9 sgRNA化學合成

使用化學合成策略的sgRNA合成服務提供100%正確的序列和所需的化學修飾,合成的sgRNA穩定性高,毒性低,編輯效率高。

圖1. Cas9-sgRNA復合物 圖2. sgRNA的二級結構


服務優勢

  1. 高效:對sgRNA進行化學修飾,提高體內的穩定性和編輯效率。
  2. 良好的穩定性:規范的質量控制,確保批次間的一致性和可追溯性。
  3. 安全:避免將外源DNA整合到細胞和免疫反應中的風險。
  4. 方便:即用型sgRNA,包含crRNA和tracrRNA的序列和功能,無需退火。

服務詳情

長度(nt) 合成規格(OD) 修飾 純化方法 服務周期
95-105 1-10 2’-OMe
Phosphorothioate
HPLC 7-10個工作日

交付內容

  1. 凍干RNA
  2. COA文件

· CRISPR-Cas9 sgRNA 體外轉錄

泓迅科技還可提供從sgRNA DNA模板合成、sgRNA體外轉錄及純化一整套服務,為客戶提供可轉入動物細胞并直接發揮作用的sgRNA產品。目前,體外轉錄的sgRNA已成功的對斑馬魚、小鼠以及絲狀真菌等物種中的基因進行了準確的編輯。

服務優勢

  1. 一站式服務:可以提供從sgRNA靶位點設計到高純度即用型sgRNA獲取的全部過程。
  2. 周期短:最快3個工作日交付產量可達20 μg。
  3. 方便快捷:即用型sgRNA可直接注射或轉染細胞進行基因編輯實驗。

服務詳情

服務名稱 產品/服務內容 交付項目
即用型sgRNA合成 sgRNA設計
DNA模板合成
體外轉錄sgRNA及純化
sgRNA和COA文件

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成泓迅案例:

泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA設計中心針對小鼠的多個基因各設計了8個sgRNA,然后進行體外sgRNA轉錄實驗,實驗周期短至2天,sgRNA制備量為10-20ug,可以極快地滿足相關細胞學實驗的一般需求。

實驗流程:

一步法合成gRNA DNA模板

一步法合成gRNA DNA模板

grna-dna

實驗結果:

  1. 將gRNA DNA模板平連至pUC57載體測序,比對結果與設計序列一致。如圖1所示。
  2. 圖1.平連結果與設計序列比對圖

    圖1.平連結果與設計序列比對圖

  3. 將通過體外轉錄得到的sgRNA在2%的瓊脂糖中進行電泳,可以看到清晰條帶。如圖2所示。
  4. 圖2. sgRNA瓊脂糖凝膠電泳圖

    圖2. sgRNA瓊脂糖凝膠電泳圖

  5. 我們對其中一條sgRNA序列進行驗證,首先將sgRNA逆轉錄獲得cDNA,設計sgRNA擴增引物,經過PCR反應獲得sgRNA的DNA序列;其次將DNA序列平連至pUC57載體進行測序,結果顯示sgRNA序列正確。如圖3所示。
  6. 圖3. sgRNA序列驗證瓊脂糖凝膠電泳圖

    圖3. sgRNA序列驗證瓊脂糖凝膠電泳圖

    注:1PCR結果的模板是sgRNA 逆轉錄cDNA;2PCR結果的模板是經DNaseI處理的sgRNA;3PCR結果的模板是體外轉錄的DNA模板

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成訂購與咨詢:
您可以通過以下任意方式下單或咨詢,工作時間我們保證在1小時內給您反饋:

  1. Email:請將您的需求發送到support@synbio-tech.com
  2. 電話咨詢:您可以直接撥打免費熱線4000-973-630(按1)聯系我們經驗豐富的工程師
  3. 在線咨詢:您有任何技術問題均可與我們進行網頁在線互動

參考文獻:

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
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[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.